Le groupe EC3.5 rassemble des enzymes appartenant à la famille des hydrolases. Elles ont pour particularité de catalyser des réactions d'hydrolyse dans des molécules possédant un carbone et un azote liés par liaison simple, double ou triple. À la différence des peptidases (groupe EC3.4), ces enzymes n'interviennent pas sur les liaisons peptidiques mais sur les groupements attachés à un atome d'azote non peptidique ou sur des bases nucléotidiques. Elles jouent un rôle principalement dans la régulation de la biosynthèse des protéines et dans le métabolisme de certains acides aminés.
